以氰化高鐵血紅蛋白為底物測定NADH-MetHb還原酶活性，或以二氯酚靛酚為底物測定黃遞酶活性，或以細(xì)胞色素b5為底物測定b5R活性。需強(qiáng)調(diào)指出的是，由于不同遺傳變異型的作用機(jī)制不同，試管中(高底物濃度下)測定的結(jié)果并不能確切地反映在活細(xì)胞內(nèi)(低底物濃度下)催化效率減低的程度。因?yàn)?，如果酶分子結(jié)構(gòu)的改變使其與底物NADH的親和力減低(Km值增大)，在生理情況下，細(xì)胞內(nèi)的NADH濃度很低，酶活性幾乎完全喪失;但在試管中測定酶活力時(shí)，加入的NADH相當(dāng)于生理濃度的幾十倍甚至上百倍，完全可以測出酶的活性。若在低底物濃度下測定酶活性，必須用時(shí)間掃描記錄其瞬時(shí)初速度，否則誤差太大。其他遺傳性酶缺陷病也都有類似問題。